亚洲无人区视频大全_亚洲成a人片在线观看无码专区_亚洲熟妇少妇任你躁在线观看无码_亚洲成人在线网站

咨詢電話

18511767098

當前位置:首頁  >  技術文章  >  細胞生長的檢查方法(二)

細胞生長的檢查方法(二)

更新時間:2016-06-23      點擊次數:4059

1.檢測細胞代謝活性

檢測細胞的代謝活性也可以反映細胞增殖的情況。在細胞增殖過程中乳酸脫氫酶的活性會增加,而活性的脫氫酶可以使得外源性的四唑鹽或者阿爾瑪藍(Alamar blue)還原成為帶有顏色還原產物。通過分光光度計或者酶標儀來讀取含染料培養基的吸光度,從而衡量細胞的代謝活性,檢測細胞增殖的情況。

四種zui常見的四唑鹽是:MTT、XTT、MTS和WST1,其還原產物為甲瓚(formazan)。

(1)四甲基偶氮唑鹽法(MTT):MTT商品名為噻唑藍,是一種黃色的染料。1983年Mosmann建立MTT比色法,用于檢測細胞存活和增殖。其原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為不溶于水的藍紫色結晶,甲瓚并沉積在細胞中,而死亡的細胞無此功能。二甲亞砜(DMSO)能溶解細胞中的甲瓚,用酶聯免疫分析儀測定其光吸收值,可間接反映活細胞數量。在一定細胞數量范圍內,MTT結晶形成的量與細胞數成正比。MTT可以用于所有細胞類型,但MTT在標準的細胞培養基中是不溶的,而且其生成的甲瓚晶體需要溶解在DMSC)中。因此,MTT主要作為終點檢測方法。另外,有研究發現過氧化物會降低MTT測定的準確度,抑制將近95%,的MTT與O2-的反應,MTT溶解產物甲瓚會吸附在納米纖維上,而致使檢測的結果呈現假陰性。

(2)二甲氧唑黃比色法(XTT):XTT是一種與MTT類似的四唑氮衍生物,可被活細胞還原形成水溶性的橘黃色的甲瓚產物,不形成顆粒,可直接用酶聯免疫分析儀檢測吸光度,故較MTT法更加快速、簡便、敏感。

但XTT水溶液不穩定,需要低溫保存,現配現用。由于XTT的代謝產物呈橘黃色,故培養體系中有些黃色代謝物和試劑可能會影響其檢測結果。與MTT一樣,過氧化物可抑制近95%的XTT與O2-的反應,故對XTT測定的準確度有一定的影響。

(3)內鹽法(MTS):MTS是一種新型的MTT類似物。MTs在偶聯劑PMS存在的條件下,可被活細胞線粒體中的多種脫氫酶還原成水溶性的有色甲瓚產物,其顏色深淺與活細胞數量在一定范圍內呈高度相關,可用酶標儀檢測。它的優點在于無放射性、快速、安全、方便、靈活及特異性強,同時又克服了MTT、XTT的缺點。

(4)四唑單鈉鹽法(WST-1):WST-1是水溶性四唑鹽試劑,是一種類似于MTT的化合物,在電子耦合試劑存在的情況下,可以被線粒體內的一些脫氫酶還原生成橙黃色的甲瓚。細胞增殖越多越快,則顏色越深;細胞毒性越大,則顏色越淺。WST-1是MTT的一種升級替代產品,和MTT或其他MTT類似產品如XTT、MTS等相比有明顯的優點。首先,MTT被線粒體內的一些脫氫酶還原生成的甲瓚不是水溶性的,需要由特定的溶解液來溶解:而WST-1和XTT、MTS產生的甲瓚都是水溶性的,可以省去后續的溶解步驟。其次,WST-1產生的甲瓚比XTT和MTS產生的甲瓚更易溶解。再次,WST-1比XTT和MTS更加穩定,加入WST-1顯色后,可以在不同時間反復用酶標儀讀板,使檢測時間更加靈活,實驗結果更加穩定。另外,WST-1和MTT、XTT等相比,線性范圍更寬,靈敏度更高。

(5)Cell countjn譬kit-8(CCK-8):CCK-8試劑中含有WST-8。WST-8是近年新開發的一種較WST-1更新的水溶性四唑鹽,檢測原理與WST-1類似,但較WST-1更穩定,靈敏度更高,溶解性更強,更易于保存。CCK-8檢測細胞增殖、細胞毒性實驗的靈敏度比MTT、XTT及MTS更高,尤其適合于懸浮細胞,高通量藥物篩選。CCK-8法細胞毒性低,細胞檢測后還可重復利用,具有更好的實用性,可替代MTT法,具有良好的應用前景。

(6)阿爾瑪藍法:阿爾瑪藍檢測試劑為細胞增殖和細胞毒性檢測提供了一種簡便、快速、可靠、安全的方法。阿爾瑪藍在氧化狀態下呈現紫藍色無熒光性,而在還原狀態下轉變為呈粉紅或紅色熒光的還原產物,可以用普通分光光度計或熒光光度計進行檢測,吸光度和熒光強度與活性細胞數成正比。阿爾瑪藍對細胞無毒、無害,不影響細胞代謝、細胞因子分泌、抗體合成等,可以對同一批細胞的生長狀態進行連續觀察和進一步的實驗。

MTT可以用于所有細胞類型,但MTT在標準的細胞培養基中是不溶的,而且其生成的甲瓚晶體需要溶解在DMSO中。因此,MTT主要作為終點檢測方法。其他三種鹽與阿爾瑪藍一樣,都是可溶且無毒的。它們可以作為連續監控手段來跟蹤細胞增殖的動態改變。其中XTT的效率較低,需要添加額外的因子。而WST-1更靈敏有效,與其他鹽相比能夠更快顯色。阿爾瑪藍的靈敏度也很高,只要微孔板的孔中有100個細胞它就能夠檢測到。四唑鹽和阿爾瑪藍氧化還原染料能夠用于多種儀器和高通量研究,非常方便。

2.檢測ATP含量

ATP是細胞能量的直接來源,細胞內的ATP含量受到嚴格的調控,死亡細胞或即將死亡的細胞幾乎不舍ATP,在細胞溶解物或提取物中測得的ATP濃度與細胞數之間存在嚴格的線性關系。因此,檢測ATP也可以得到細胞增殖的信息。

ATP檢測可以用成色反應、熒光、化學發光或同位素等方法實現。目前應用zui廣的方法基于螢火蟲熒光素酶(催化熒光素氧化,消耗ATP。如果有ATP存在,則熒光素就會發光,發光效率*,發光量與ATP含量呈很好的線性關系,可以反映細胞內ATP的含量。

3.活細胞熒光標記

羥基熒光素二醋酸鹽琥珀酰亞胺酯(CFSE)是一種可穿透細胞膜的熒光染料,CFSE能夠輕易穿透細胞膜,在活細胞內聚積并與胞內蛋白共價結合,水解后的CFSE釋放出熒光物質,這些共價結合的熒光物分子很少從細胞內脫落。CFSE標記后的細胞用于體內觀察可以長達數周。當細胞分裂時,CFSE標記熒光可平均分配至兩個子代細胞中,因此其熒光強度是親代細胞的一半。這樣,在一個增殖的細胞群體,各連續代細胞的熒光強度呈對數遞減,利用流式細胞儀在488nm激發光和熒光檢測通道可對其進行分析。

4.增強標記檢測

增殖細胞特異性地表達某些特定蛋白,利用特異性的單抗來識別這些增殖細胞。例如,在人體細胞中,Ki-67,PCNA等可以作為細胞增殖的標志。但是,由于需要組織切片,這種方法無法進行高通量分析。不過這一方法頗受癌癥研究者們的青睞,因為它能夠用來檢測體內腫瘤細胞的增殖。

©2025 北京北納創聯生物技術研究院版權所有 All Rights Reserved.     備案號:京ICP備12027104號-6

技術支持:化工儀器網     管理登陸     sitemap.xml

亚洲无人区视频大全_亚洲成a人片在线观看无码专区_亚洲熟妇少妇任你躁在线观看无码_亚洲成人在线网站


      欧美三片在线视频观看| 久久久久久久免费视频了| 亚洲卡通动漫在线| 国产精品久久久久久久久免费丝袜 | 欧美一区在线视频| 欧美日韩在线观看一区二区| 欧美在线free| 欧美日韩一区二区在线观看| 在线播放91灌醉迷j高跟美女 | 欧美日韩国产一级| 欧美亚洲丝袜传媒另类| 色视频成人在线观看免| 在线影视一区二区三区| 欧美性色欧美a在线播放| 欧美日韩一卡二卡三卡| 欧美日韩二区三区| 欧美一区二区三区影视| 日韩三级免费观看| 精品国产91亚洲一区二区三区婷婷| 精品国产欧美一区二区| 久久精品网站免费观看| 69av一区二区三区| 日韩三级精品电影久久久| 欧美精品一区二区蜜臀亚洲| 国产午夜久久久久| 亚洲欧美日韩综合aⅴ视频| 一区二区三区欧美日| 日韩在线a电影| 美女爽到高潮91| 国产黄色91视频| 成年人午夜久久久| 久久久久久久久久电影| 最新欧美精品一区二区三区| 亚洲成在线观看| 欧美日韩一区二区三区高清 | 色天天综合色天天久久| 91精品国产麻豆国产自产在线| 欧美mv日韩mv国产网站| 日本一区二区三区高清不卡| 亚洲欧美日韩国产中文在线| 天堂久久久久va久久久久| 国产在线一区观看| 91免费在线看| 亚洲欧美日韩精品久久久久| 色成年激情久久综合| 欧美一区二区三区成人| 中文字幕免费在线观看视频一区| 亚洲精品国产a| 男男gaygay亚洲| 成人动漫av在线| 国产精品国产精品国产专区不片| 亚洲国产精品视频| 91麻豆精品国产91久久久久久久久| 国产亚洲欧美日韩日本| 亚洲午夜一区二区| 国产一区二区在线观看免费 | 亚洲视频 欧洲视频| 欧美亚洲免费在线一区| 亚洲精品在线免费观看视频| 亚洲美女偷拍久久| 久久精品99国产精品日本| 26uuu国产电影一区二区| 一区二区在线电影| 欧美女孩性生活视频| 中文字幕va一区二区三区| 亚洲6080在线| 成人理论电影网| 日韩毛片精品高清免费| 欧美网站一区二区| 国产嫩草影院久久久久| 日产欧产美韩系列久久99| 9色porny自拍视频一区二区| 亚洲精品一二三四区| 欧美一区二区三区在| 亚洲免费在线播放| 国产在线不卡一区| 国产精品天干天干在线综合| 色噜噜狠狠色综合欧洲selulu| 久久色.com| 日韩电影免费在线看| 久久综合九色综合97婷婷女人 | 欧美一区三区二区| 亚洲免费在线电影| 粉嫩一区二区三区性色av| 亚洲欧美偷拍三级| 日韩欧美国产一区二区在线播放| 一区二区三区在线观看视频| 国产+成+人+亚洲欧洲自线| 亚洲蜜臀av乱码久久精品蜜桃| 欧美一级片在线| 亚洲愉拍自拍另类高清精品| 不卡av免费在线观看| 香蕉乱码成人久久天堂爱免费| www亚洲一区| 男女男精品视频| 国产精品日日摸夜夜摸av| 欧美乱熟臀69xxxxxx| 一区二区三区影院| a级高清视频欧美日韩| 色综合天天综合| 国产精品婷婷午夜在线观看| 国产在线不卡一卡二卡三卡四卡| 亚洲欧美一区二区三区孕妇| www成人在线观看| 美腿丝袜亚洲一区| 中文字幕一区视频| 欧美岛国在线观看| 免费观看一级特黄欧美大片| 中文字幕一区在线| 欧美精品一区二区三区一线天视频 | 激情五月激情综合网| 亚洲男人都懂的| 久久综合久久鬼色| 精品亚洲免费视频| 一区二区三区四区av| 久久久久97国产精华液好用吗| 久久91精品久久久久久秒播| 综合久久国产九一剧情麻豆| 久久久噜噜噜久久中文字幕色伊伊| 久久福利资源站| 一级特黄大欧美久久久| 国产女同性恋一区二区| 国产成人精品免费| 在线视频欧美精品| 亚洲在线视频免费观看| 国产视频一区不卡| 日韩一区二区三区在线| 美脚の诱脚舐め脚责91| 一区二区三区四区亚洲| 国产精品国产精品国产专区不蜜 | 国产午夜一区二区三区| 日韩精品一区二区三区四区| 老司机免费视频一区二区| 一区二区三区不卡视频在线观看 | 午夜天堂影视香蕉久久| 中文字幕在线观看一区| 中文字幕乱码亚洲精品一区| www.日韩在线| 欧美日韩一区 二区 三区 久久精品| 亚洲影院久久精品| 亚洲欧洲一区二区三区| 日本一区二区三区久久久久久久久不| 成人a级免费电影| 911国产精品| 精品一区二区免费在线观看| 一本久道久久综合中文字幕| 亚洲午夜精品网| 综合色中文字幕| 亚洲色图一区二区三区| 国产欧美精品区一区二区三区 | 国产欧美一区二区精品性| 久久久影视传媒| 成人高清视频免费观看| 69久久夜色精品国产69蝌蚪网| 久久99国内精品| 在线视频亚洲一区| 日韩高清在线不卡| 亚洲不卡av一区二区三区| 亚洲综合色婷婷| 亚洲人成影院在线观看| 亚洲欧美一区二区三区久本道91| 国产精品美女久久久久久久| 国产精品乱码一区二区三区软件| 久久蜜桃av一区二区天堂| 精品国产乱码久久久久久浪潮 | 亚洲男同1069视频| 国产精品不卡视频| 亚洲卡通欧美制服中文| 亚洲免费观看高清完整版在线| 亚洲精品视频在线| 亚洲男同1069视频| 亚洲午夜av在线| 午夜伊人狠狠久久| 日本中文字幕一区二区有限公司| 一本一道综合狠狠老| 日韩电影在线一区二区三区| 色av综合在线| 久久爱www久久做| 欧美体内she精高潮| 国产一区二区三区在线观看精品| 精品视频1区2区| 国产风韵犹存在线视精品| 日韩精品自拍偷拍| 91视频一区二区三区| 欧美激情一区二区三区在线| 国产欧美一区二区三区网站| 亚洲色欲色欲www在线观看| 一区二区三区在线视频观看 | 国产一区在线不卡| 91精品久久久久久久99蜜桃| 成人免费看视频| 久久久精品免费免费| 国产精品欧美一区喷水| 亚洲综合精品久久| 色网综合在线观看| 国产在线国偷精品免费看| 日韩一区二区三区免费观看| 99热这里都是精品| 亚洲国产精品二十页| 亚洲色图丝袜美腿|